植物elisa試劑盒檢測將純化的人白細胞介素抗體涂于微孔板上，制成固相抗體。將白細胞介素依次加入包被單克隆抗體的微孔中，與HRP標記的白細胞介素抗體結合形成抗體-抗原-酶標記的抗體復合物。在*清洗后，將基板TMB添加到顏色中。在使用之前，應在室溫下將工具箱從冷藏環(huán)境中取出15-30分鐘。如果打開后酶標板沒有用完，應將酶標板存放在密封袋中。在使用之前，應在室溫下將工具箱從冷藏環(huán)境中取出15-30分鐘。如果打開后酶標板沒有用完，應將酶標板存放在密封袋中。
1、待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔；設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。
2、酶標板置4℃，包被過夜。
3、洗板：吸干孔內(nèi)反應液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
4、陰性對照孔每孔加入PBS50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
5、酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
6、洗板，同（4）。
7、每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液100μl。
8、酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
9、洗板，同（4）。
10、每孔加TMB顯色液100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。
11、每孔加100μl2mol/LH2SO4終止反應。
12、分別測450nm吸光值W1和630nm吸光值W2，zui終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
13、數(shù)據(jù)處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。
植物elisa試劑盒檢測的操作注意事項：
1、試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
2、實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
3、不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4、使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5、使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品
6、洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7、底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8、加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9、按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
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